زیست شناسی

زیست شناسی

این وبلاگ برای تمام عزیزانی که به علوم زیستی علاقه دارند ایجاد شده و از همه چیز و همه جا که مرتبط با زیست شناسی باشد اطلاعات میدهد
زیست شناسی

زیست شناسی

این وبلاگ برای تمام عزیزانی که به علوم زیستی علاقه دارند ایجاد شده و از همه چیز و همه جا که مرتبط با زیست شناسی باشد اطلاعات میدهد

جلوگیری از تقلبات قصابی ها با استفاده از تکنیک تعیین جنسیت لاشه

چکیده:
از جمله عمده ترین مسائل جهانی در ارتباط با بازاریابی، فروش و صادرات گوشت، همانا کیفیت گوشت تولیدی و مطابق با ذائقه های مختلف مصرف کننندگان می باشد. در قرن اخیر، صنعت پرورش و تولید حیوانات گوشتی به سوی تولید گوشت بدون چربی، تولید بیشتر و نتیجناً افزایش گوشتهای مطبوع و حاوی تردی کافی حرکت می کند. گوشت حیوان نر از ارزش اقتصادی بالاتری نسبت به حیوان ماده برخوردار است چرا که حیوانات ماده عمدتا به منظور تولید مثل نگهداری می شود و طبیعاً ذبح آنها زمانی صورت می پذیرد که به سن پیری رسیده باشند. موضوع پژوهش زیر استفاده از تکنیک تعیین جنسیت قطعات گوشت عرضه شده در قصابی ها و بررسی صحت و سقم ادعای آن نسبت به فروش گوشت حیوان نر به مشتری می باشد. نمونه های قطعات گوشت از 10 مغازه قصابی در سطح استان (سه نمونه از هر مغازه) به طور تصادفی اخذ گردیده و استخراج DNA به کمک روش Boom (1989) و واکنش زنجیره پلی مراز (PCR) در ابتدا برای تکثیر قطعه ای از ژن لپتین (کنترل) و سپس جهت تکثیر قطعه 307 جفت بازی از ناحیه ای از کروموزوم Y به نام لوکوس BRY1 گاوی انجام گرفت. نتایج حاصل از بررسی نشان داد که در بیشتر موارد عرضه کنندگان گوشت از صداقت لازم با مشتری برخوردار نبوده و از فروش گوشت حیوان جوان و نر شانه خالی می کنند.
کلمات کلیدی: تعیین جنسیت لاشه، کیفیت گوشت، تقلب در فروش
مقدمه:
از جمله عمده ترین مسائل جهانی در ارتباط با بازاریابی، فروش و صادرات گوشت، همانا کیفیت گوشت تولیدی و مطابق با ذائقه های مختلف مصرف کننندگان، می باشد. در قرن اخیر، صنعت پرورش و تولید حیوانات گوشتی به سوی تولید گوشت بدون چربی، تولید بیشتر و نتیجتاً افزایش گوشتهای مطبوع و حاوی تردی کافی، حرکت می کند. امروز توجه به تردی گوشت(Meat tenderness) از مواردی است که همواره شرکتهای تجاری جهانی را در یافتن راهکارهای مناسب در جهت ارتقا کیفیت این پارامتر، به رقابت واداشته است. از مشکلات کنونی در این رابط، فقدان روش طبقه بندی صحیح لاشه، بر اساس تردی نهایی گوشت می باشد. روشهای پیشنهادی اخیر نظیر سیستم طبقه بندی USDA به میزان کافی در پیش بینی تردی گوشت کارآئی ندارند و بنابراین نیاز به روشهایی جدید که بتواند گوشت را از لحاظ تردی رتبه بندی نمایند، همواره احساس شده است. بکارگیری روشهای ابداعی جدید در کنار روشهای سنتی قبلی و معمول رتبه بندی گوشت، قطعا در بهبود کیفیت و تردی گوشت موثر واقع خواهند گردید. از جمله پارامترهایی که قبل از ذبح دامهای اهلی، بر تردی و کیفیت گوشت موثر می باشد، می توان به تغدیه، استرس، ژنتیک، جنس، مدیریت اشاره کرد و از جمله فاکتورهایی که پس از ذبح حیوان با تردی و کیفیت گوشت نهایی مرتبط هستند، می توان زمان پیری پس از جمود نعشی، تحریک پذیری الکتریکی ماهیچه، pH ، لرزش ماهیچه در موقع ذبح، مقدار رگ وپی، دفعات انجماد و ذوب گوشت و بالاخره روشهای پخت گوشت را نام برد. در تهیه خوراک کباب که مطلوب ذائقه هر ایرانی است کیفیت گوشت خریداری شده از اهمیت عمده ای برخوردار است. معمولا گوشت دام نر از ارزش اقتصادی بالاتری نسبت به دام ماده برخوردار است چرا که دام ماده به منظور تولید مثل پرورش داده می شود و طبیعتا ذبح آن در 7 الی 8 سالگی صورت می پذیرد یعنی زمانی که ضخامت فیبرهای ماهیچه ای افزایش یافته و سطح کلاژن بالایی را برخورد دار می باشد. موضوع مطالعه فوق استفاده از تکنیک ساده برای تعیین جنسیت قطعات گوشت عرضه شده در قصابیها و ارزیابی صحت و سقم فروشنده مبنی بر نر جنس حیوان ذبح شده می باشد.
مواد و روشها:
نمونه گیری
تعداد 30 قطعه گوشت متعلق به ده مغازه عرضه گوشت در سطح استان بطور تصادفی انتخاب و اقدام به بیوپسی گردید. نمونه ها در فلاسک حاوی یخ در همان روز به آزمایشگاه انتقال داده شد و کاملا و به طور مجزا چرخ گردید و سپس با استفاده از ازت مایع پودر شد و 200 میلی گرم از هر نمونه توزین و به داخل تیوپ اپندروف منتقل و پس از شمارگذاری آماده استخراج شد.
استخراج DNA: استخراج DNA از نمونه ها با استفاده از روشBoom و همکاران (1989) با استفاده از کیت Diatom انجام گرفت. این روش مبتنی براستفاده از ماده لیز کننده گوانیدین تیوسیانات و جذب کننده سیلیکاژل می باشد. بدین منظور ابتدا 200 میکرولیتر از خون برداشته سپس 500 میکرولیتر بافر هضم کننده (M5 گوانیدین تیوسیانات،mM 20EDTA،mM40 Tris،40 گرم TritonX100، 10 گرم DTT ) به نمونه اضافه شده، نمونه ها به مدت 5 دقیقه در بن ما ری حاوی 65 درجه سانتیگراد انکوبه گردیدند. سپس 20 میکرولیتر محلول نوکلئاز (4 گرم ذرات سیلیکا،100 میکرولیترگوانیدین) اضافه شد و به مدت 10 دقیقه به آرامی ورتکس گردید. سپس به محیط همگن شده، 400 میکرو لیتر بافرسالین( EDTA 20mM , Tris-HCl 10mM , KCl 1M , NaCl 1M )اضافه و در نهایت از طریق ماده Extra Gene (10% رزین 02/0 % ماده رنگی OrangG، 01 /0 درصدTriton X 100 )، DNA زرد رنگ از سایر ناخالصیها جدا گردید. جهت تعیین غلظت نمونه های استخراج DNA شده، از روش الکتروفورز مقایسه ای آگارز با استفاده از مقادیر مشخصی DNA فاژ لامبدا و الکتروفورز استفاده گردید.
انتخاب آغازگرها: آغازگرهای این مقاله توسط از تحقیق Matthew و همکاران (1990) انتخاب و آغازگرها دوجفت27 نوکلئوتیدی بودند که قطعه ای بطول 307 جفت باز از ناحیه Male specific region به نام لوکوس BRY1 گاوی را تکثیر می نمایند. این قطعه در فرد گاو نر قابل تکثیر و در فرد ماده وجود ندارد.
Forward primer:
-GGATCCGAGAGACACAGAACAGGCTGC
Reverse primer
- TGATCAAGCTAATCCATCCATCCTAT
واکنش زنجیره‌ای پلیمراز(PCR)
انجام واکنش زنجیره ای پلیمراز به کمک کیت لیوفیلزه PCR Universal (Iso Gene–Moscow) که حاوی Mix، PCR Diluent و Mineral Oil بود بروش استاندارد انجام گرفت. غلظت نهایی مواد در 25 میکرولیتر عبارت بودند از: یک واحد آنزیم Taq Polymerase، 200 میکرومول از هر dNTP، 200 میلی مول MgCl2 ، 20-10 پیکامول مخلوط پرایمرها، 100-50 نانوگرم DNA و بافر استاندارد. واکنش PCR با برنامه حرارتی زیر به تعداد 35 سیکل در دستگاه ترموسایکلر (UNIOII) انجام شد. برنامه حرارتی عبارت بود از: 90 درجه سانتیگراد جهت واسرشته شدن DNA بمدت 60 ثانیه، دمای 58 درجه سانتیگراد جهت اتصال پرایمرها بمدت 30 ثانیه و دمای 72 درجه سانتیگراد جهت سنتز بمدت 1 دقیقه.
الکتروفورز:
جهت مشاهده محصولات PCR از ژل آگارز 8/1 % و ولتاژ 100-70 ولت بمدت 2 ساعت استفاده شد. رنگ آمیزی ژل با اتیدیوم بروماید (mg/ml 10) انجام گرفت. قطعه تکثیر شده زیر لامپ UV با طول موج 230 نانومتر مشاهده و عکسبرداری توسط دستگاه مدل Biometra صورت گرفت.
نتایج:
استفاده از روش Boom و همکاران(1989) برای استخراج DNA از نمونه گوشت برتری خوبی را در استحصال DNA نشان داد(شکل 1).
شکل شماره 1: کمیت و کیفیت DNA تخلیص شده از گوشت

نتایج آزمایش نشان داد که در بعضی موارد فروشندگان گوشت از صداقت لازم با مشتریان برخوردار نمی باشند و تقلب در گوشت همیشه از مشکلات خریداران می باشد از کل نمونه های بررسی 35 درصد گوشت نر و بقیه گوشت ماده تشخیص داده شد.


برگرفته از : http://www.parsbiology.com/